中文名：总RNA提取试剂 (Trizol)
英文名：Trizol
纯度：BioReagent, 即用型, 分子生物学级, 无RNA酶, for DNA and RNA applications
货号：T751379-500ml
包装：500ml
存储温度：室温
产品介绍：
Trizol是细胞或组织总RNA抽提试剂。本产品采用和Invitrogen公司的TRlzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步骤完全相同。Trizol的颜色和TRIzol相同，加入氯仿后上层呈无色，下层呈红色，便于吸取上层水相。Trizol抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。裂解细胞或和组织共匀浆时，Trizol 可以保持样品中RNA的完整性，即可以有效抑制RNA的降解。每1x106细胞用Trizol抽提可得5~15μg RNA；每mg组织用Trizol抽提可得1~10μgRNA。产量因细胞和组织不同而异。Trizol抽提所得RNA可直接用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNaseprotection assay，cDNA克隆，以及RTPCR；也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
注意事项：
1. 如果需要测量RNA的A260/A280的比值，建议使用RNA定量缓冲液对样品稀释后，进行测量。
2. 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可180°C烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01% DEPC至重蒸水或MiliQ级水中，处理过夜，灭菌即成DEPC水。
3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽RNA，推荐先加入适量Trizol，并裂解样品后冻存。
4. 必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
5. Trizol含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。
使用说明：
1 样品均浆
1.1 确定样品的种类，在室温下，根据下表进行均浆。样品的体积不能超过Trizol的10%。必须确保使用足够量的Trizol，因为不足量的Trizol，会导致DNA污染RNA。
| 样品类型 |
流程 |
| 组织 |
1. 50-100mg组织+1mL Trizol；
2. 使用均浆器均浆样品。
注意：收集样品后，立即进行实验，或立即冻存。 |
| 贴壁细胞 |
1. 去除培养基；
2. 在每10cm2的培养皿中加入1mL Trizol；
注意：在35mm培养皿中加入1mL Trziol，在60mm培养皿中加入3mL Trziol，在100mm培养皿中加入8mL Trziol，与细胞数无关；
3. 在培养皿中用吸头反复吹打裂解细胞。 |
| 悬浮细胞 |
1. 离心收集细胞后，去除培养基；
2. 在0.25mL样品(5~10x106cells，动物、植物或酵母，或者10x107细菌细胞)中加入0.75mL Trizol；
注意:加入Trizol之前不要洗涤细胞，避免增加mRNA降解的可能性;
3. 反复吹打裂解细胞,酵母与细菌细胞需要均浆。 |
注意： 10cm2， 5~10x106， 10x107，数字2，6，7均为上标
1.2 (可选择)当含大量脂肪、蛋白、多糖或细胞外基质(例如，肌肉、脂肪或植物的块胶组织)的样品制备RNA时，需增加离心步骤，从样品中去除不溶解的物质。注意: 如果进行DNA分离，不要离心。
| 样品类型 |
流程 |
| 高脂肪、蛋白、多糖或细胞外基质的组织或细胞 |
1. 均浆后，4°C下，12000g离心10min；
注意:沉淀中含细胞外基质、多糖及高分子DNA，而上清液中含RNA。在高脂肪样品中，上清液的上层为脂肪层；
2. 去除脂肪层；
3. 将上清液转移至新的试管中。 |
2 相分离:
2.1 在室温下，将均浆液孵育5min,允许核蛋白复合体分离;
2.2 在每1mL Trizol制备的均浆液中加入0.1mL分相试剂BCP或者氯仿，盖紧盖子;
2.3 剧烈震荡试管15s;
2.4 在室温下孵育2-3min;
2.5 在4°C下，12000g 离心15min;
注意: 裂解液分为红色的苯酚-BCP层(氯仿层)，中间层，无色的水相。RNA完全保留于水相中。上层的水相大约为总体积的50% ;
2.6 将试管倾斜45。，小心吸出上层溶液，不要扰动中间层及苯酚层;
2.7 将上层溶液转移至新的试管中;
3 RNA沉淀
使用恰当预防措施避免RNase污染。
3.1 (可选择) 当从小量样品( < 10°细胞或< 10mg组织)中沉淀RNA时，应在水相中加入5~10μg无RNase酶的糖原(glycogen)； 注意：糖原(glycogen) 与RNA共沉淀，当其浓度≤4mg/mL时，不抑制第一链的合成，不抑制PCR反应。
3.2 在每1mL Trizol均浆后，所得到的水相中加入0.5mL异丙醇;
3.3 在室温下孵育10min;
3.4 在4°C下，12000g 离心10min;
注意：在离心前，RNA 是不可见的，离心后，在试管底部及侧壁形成胶样沉淀。
4 RNA洗涤
4.1 从试管中取出上清液，只剩下RNA沉淀;
4.2 用1mL75%乙醇洗涤沉淀(起始为1mL Trizol所得到的沉淀) ;
4.3 短暂涡旋，然后在4°C下，7500g 离心5min，其上清;
